Активатор Beclin-1 I, TAT-Beclin-1

Описание:

Активатор Beclin-1 I, TAT-Beclin-1 — это клеточно-проницаемый пептид, полученный из Atg6/Beclin1, индуцирующий аутофагию. Активирует Beclin1, конкурируя с его негативным регулятором GAPR-1/GLIPR2. TAT-Beclin-1 (минимальная эффективная концентрация ≤10 мкМ, установленная по увеличению соотношения LC3-II/LC3-I и снижению уровня p62 через 3 часа обработки в культурах A549, COS-7, HBEC30-KT, HCC827, HeLa, MEF, THP-1) состоит из эволюционно консервативного домена (ECD) последовательности связывания Nef, полученной из человеческого Atg6/Beclin1 (аминокислоты 267-284), с заменой трёх неконсервативных остатков (H275E, S279D и Q280E) для улучшения растворимости, и N-концевой области, слитой с последовательностью домена трансдукции белка (PTD) HIV-1 Tat (аминокислоты 47-57) через связь -Gly-Gly- для облегчения клеточной доставки и активации Beclin1 путём конкурентного связывания с его негативным регулятором «гольджи-ассоциированным белком, родственным патогенезу растений-1» (GAPR-1/GLIPR2) на поверхности аппарата Гольджи. Показано, что эффективно индуцирует аутотический процесс — форму клеточной смерти, зависимую от аутофагии, морфологически и фармакологически отличную от апоптоза и некроза, в различных культурах клеток человека, крысы и мыши дозо- и времязависимым образом (минимальная эффективная концентрация >5 мкМ после 5 часов обработки по оценке окрашивания HeLa трипановым синим; кратность контроля по положительной к трипановому синему популяции при воздействии 20 мкМ пептида: 3/1 ч, 9/4 ч, 20/8 ч). Эффект блокируется ингибитором аутофагии 3-MA (10 мМ, арт. 189490; [T-B] = 20 мкМ) или ингибированием Na+/K+-АТФазы сердечными гликозидами, но нечувствителен к Z-VAD-FMK (арт. 219007) или Nec-1 (арт. 480065 и 505224). Индукция аутофагии с помощью Tat-Beclin1 также приводит к очистке от мелких (<1 мкм) агрегатов CFP-htt103Q в клетках HeLa (снижение на 59% и 85% популяции с агрегатами и среднего количества агрегатов на клетку соответственно; 20 мкМ/4 ч/д в течение 2 дней). Некоторыми исследованиями показано, что нецитотоксическая индукция аутофагии при более низких дозах Tat-Beclin1 и ограниченном времени воздействия терапевтически полезна для блокирования репликации РНК-вирусов как в культурах клеток (обработка 10 мкМ пептида через 4 ч после заражения CHIKV, SINV или WNV в культурах HeLa; предварительная обработка 0,5-5 мкМ пептида за 24 ч до заражения ВИЧ в культурах человеческих MDM) in vitro, так и у новорожденных мышей, инфицированных CHIKV (15 мг/кг/сут внутрибрюшинно) in vivo. Хотя биодоступность Tat-Beclin1 ограничена периферическими тканями у мышей, пептид на основе ретро-инвертированной последовательности Tat-Beclin1 (арт. 506416) демонстрирует эффективность в модели неонатального поражения ЦНС вирусом WNV у мышей.

Применение:

Активатор Beclin-1 I, TAT-Beclin-1 применяется для индукции аутофагии в исследованиях механизмов клеточной смерти и репликации вирусов. В научных исследованиях используется для изучения аутотического процесса — уникального типа гибели клеток, отличного от апоптоза и некроза. Пептид эффективен в блокировании репликации РНК-вирусов, включая CHIKV, SINV, WNV и ВИЧ, что делает его перспективным инструментом в разработке противовирусной терапии. Также применяется в исследованиях нейродегенеративных заболеваний для очистки клеток от белковых агрегатов, таких как CFP-htt103Q. Продукт поставляется НПО ЭкоТек для использования в молекулярно-биологических и биохимических экспериментах.