Пиперазин-N,N’-бис(2-этансульфоновая кислота) (PIPES)

Описание:

Пиперазин-N,N’-бис(2-этансульфоновая кислота), сокращённо PIPES, относится к серии буферов на основе этанесульфоновых кислот, разработанных Гудом и соавторами для биохимических исследований. Основные критерии создания: pKa в физиологическом диапазоне (6,76 при 20°C и 6,8 при 37°C), высокая растворимость в воде, минимальная растворимость в органических растворителях, стабильность к ферментативному гидролизу и окислению, низкое поглощение в УФ-диапазоне, незначительное влияние температуры на pKa и отсутствие комплексообразования с ионами металлов. PIPES особенно ценен в работе с клеточными культурами, так как его pKa близка к физиологическому pH. Буфер не токсичен для клеток млекопитающих, не проникает через биологические мембраны и химически инертен.

Применение:

PIPES широко применяется в молекулярной биологии: для электрофоретического разделения глиоксилированных РНК в агарозных гелях, картирования РНК с нуклеазой S1 и в анализах защиты от рибонуклеазы. В гистологии буфер незаменим при фиксации тканей глутаровым альдегидом для электронной микроскопии. PIPES используется в исследованиях цитоскелета, включая реконституцию димеризованных субъединиц тубулина α и β после иммуноаффинной очистки. Буфер рекомендован для изучения каспаз 3, 6, 7 и 8 в апоптозе in vitro. Важное преимущество — отсутствие хелатирования ионов металлов, что делает PIPES идеальным для ферментативных тестов, анализа белков и кристаллизации макромолекул. В работах НПО ЭкоТек продемонстрирована эффективность PIPES при культивировании термостабильных мутантов мембранных белков в E. coli.