Лентивирусный биосенсор GFP-LC3 LentiBrite

Описание:

Лентивирусный биосенсор GFP-LC3 LentiBrite предназначен для визуализации автофагии в живых клетках. Автофагия — это деградационный путь, обеспечивающий клетки рециклированными питательными веществами в условиях стресса, и играет как защитную, так и вредную роль при многих заболеваниях, включая рак, нейродегенерацию и инфекции. Белки семейства LC3 играют ключевую роль в созревании аутофагосомы — центральной органеллы автофагии. Предшественники LC3, диффузно распределенные в цитозоле, протеолитически процессируются с образованием LC3-I. При инициации автофагии C-концевой глицин модифицируется присоединением фосфатидилэтаноламина, образуя LC3-II, который быстро транслоцируется на формирующиеся аутофагосомы в виде точечных структур. ДНК-конструкции, кодирующие флуоресцентные белки, слитые с LC3, широко используются для мониторинга образования аутофагосом методом флуоресцентной микроскопии. Лентивирусные частицы LentiBrite GFP-LC3 обеспечивают яркую флуоресценцию и точную локализацию, позволяя анализировать автофагию в живых клетках, включая труднотрансфицируемые типы клеток (первичные, стволовые). Преимущества: высокая эффективность трансдукции делящихся и неделящихся клеток, длительная стабильная экспрессия, низкая иммуногенность. Биосенсор позволяет обнаруживать присутствие/отсутствие белка и его субклеточную локализацию в живых клетках с помощью флуоресцентной микроскопии или покадровой видеосъемки.

Применение:

Применение: флуоресцентная микроскопия живых клеток, иммуноцитохимия, анализ ингибиторов автофагии. Клетки HT-1080, HeLa, HUVEC, HuMSC трансдуцировали лентивирусными частицами при MOI 20-40 в течение 24 ч. После индукции автофагии с помощью EBSS и ингибитора лизосом наблюдали точечное распределение GFP-LC3. 3-метиладенин (3-MA) полностью блокировал образование аутофагических точек. Рекомендуется анализ в течение 24-48 ч после трансдукции; возможна заморозка инфицированных клеток для сохранения экспрессии. Категория исследований: апоптоз и рак, нейронауки.