Набор для скрининга внеклеточного матрикса Millicoat® ECM

Описание:

Клеточная адгезия играет ключевую роль в клеточной коммуникации и регуляции, а также имеет фундаментальное значение для развития и поддержания тканей. Ученые постоянно изучают адгезию и миграцию различных типов клеток на различных белках внеклеточного матрикса (ВКМ). Набор Millicoat® для оценки адгезии клеток представляет собой 12 съемных стрипов по 8 лунок в рамке планшета для удобства и гибкости при постановке анализов. Лунки в рядах A–G покрыты белками ВКМ человека. Ряд H каждого стрипа покрыт БСА, который служит отрицательным контролем. Набор для скрининга включает отдельные 96-луночные планшеты с фибронектином, витронектином, ламинином, коллагеном I и коллагеном IV. Клетки высевают на покрытый субстрат, затем прикрепившиеся клетки фиксируют и окрашивают. Относительную адгезию определяют по оптической плотности. Набор поставляется компанией НПО ЭкоТек.

Применение:

ПРОЦЕДУРА: Для оптимальной производительности анализа используйте субконфлюэнтные клеточные культуры. Для этого за 1–2 дня до анализа разделите клетки. 1. Регидратируйте стрипы 200 мкл PBS на лунку в течение минимум 15 минут при комнатной температуре. Удалите PBS. 2. Приготовьте суспензию одиночных клеток, желательно с использованием неферментативного диссоциирующего буфера. Оптимальную плотность клеток определяют титрованием. Обычно используют диапазон от 1x10E5 до 1x10E7 клеток/мл. 3. Добавьте 100 мкл суспензии клеток в каждую лунку. Инкубируйте планшет при 37°C в CO2-инкубаторе в течение 1 часа. Аккуратно промойте планшет 3 раза PBS, содержащим Ca²⁺/Mg²⁺ (200 мкл/лунка). 4. Добавьте 100 мкл 0,2% кристаллического фиолетового в 10% этаноле в каждую лунку. Инкубируйте 5 минут при комнатной температуре. Удалите краситель. Аккуратно промойте планшет 3 раза PBS (300 мкл/лунка). 5. Добавьте 100 мкл солюбилизирующего буфера (50/50 смесь 0,1 M NaH₂PO₄, pH 4,5 и 50% этанола) в каждую лунку. Инкубируйте при комнатной температуре при легком встряхивании до полного растворения красителя (около 5 минут). 6. Определите оптическую плотность при 540–570 нм на планшетном ридере. Категория исследования: клеточная структура. Набор для скрининга Millicoat® включает отдельные 96-луночные планшеты с фибронектином, витронектином, ламинином, коллагеном I и коллагеном IV.