Набор MTT для оценки клеточной пролиферации

Описание:

MTT (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид) — бледно-жёлтый субстрат, который расщепляется живыми клетками с образованием тёмно-синего формазана. Процесс требует активных митохондрий; даже свежемёртвые клетки не расщепляют MTT. Колориметрический анализ используется для оценки пролиферации или комплемент-опосредованной цитотоксичности. Набор содержит все необходимые реагенты для проведения анализа в 96-луночных планшетах. Результаты: нормально детектируется от 200 до 50 000 клеток. Оптическая плотность прямо пропорциональна числу клеток.

Применение:

Процедура: 1. Проведите анализ лимфокинов, митогенов или комплемент-опосредованной цитотоксичности стандартными методами в 96-луночных планшетах (конечный объём среды 0,1 мл, среда может содержать до 10% эмбриональной бычьей сыворотки). 2. В конце добавьте 0,01 мл раствора MTT в каждую лунку. 3. Инкубируйте 4 часа при 37°C. 4. Добавьте 0,1 мл изопропанола с 0,04 N HCl, тщательно перемешайте. 5. Измерьте оптическую плотность при 570 нм (референс 630 нм) в течение часа. Результаты: MTT-тест детектирует 200–50 000 клеток. Абсорбция линейна числу клеток.