Wnt-5a белок, рекомбинантный мышиный

Описание:

Рекомбинантный белок Wnt-5a мыши, полученный из кондиционированной среды с использованием аффинной хроматографии на Blue-Sepharose, гель-фильтрации и гепарин-аффинной хроматографии. Wnt-5a — член высококонсервативного семейства белков Wnt, состоящий из 352 аминокислот, включая 23 консервативных цистеина и один цистеин, модифицированный пальмитатом, что необходимо для связывания с рецептором и биологической активности. Белок содержит N-концевой сигнальный пептид, обеспечивающий секрецию в среду при экспрессии в клеточной культуре. Лиганды Wnt связываются с ко-рецепторами на поверхности клеток, состоящими из белка Frizzled и липопротеинового рецептора LRP5/6. Wnt-5a относится к неканоническому классу белков Wnt, которые не зависят от β-катенина или ингибируют его сигнализацию. При связывании с рецептором Wnt-5a вызывает высвобождение внутриклеточного Ca2+, активируя PKC и CaMKII, что ведет к активации киназ TAK1 и NLK. NLK фосфорилирует комплекс Lef1/TCF, ингибируя образование комплекса β-катенин-Lef1/TCF-DNA. Сигналинг Wnt участвует в контроле дифференцировки стволовых клеток и регуляции взрослых стволовых клеток. Показано, что инъекция эмбриональных стволовых клеток в сердце корректирует сердечные дефекты благодаря секреции факторов, среди которых Wnt-5a играет ключевую роль (Fraidenraich и Benzra, 2006).

Применение:

Белок обладает высокой адгезивностью и прилипает к пластиковой посуде в отсутствие детергента Chaps. Рекомендуется вносить белок непосредственно на клетки в необходимом разведении без предварительной фильтрации. Токсичность Chaps в буфере для хранения следует проверить эмпирически на конкретной клеточной линии перед использованием Wnt-5a. Обычно минимальное разведение 1:1000 на клетках млекопитающих дает конечную концентрацию Chaps, нетоксичную для клеток. При длительном воздействии (дни/недели) рекомендуется ежедневно заменять среду, содержащую Wnt-5a, а не добавлять белок к существующей среде, чтобы избежать накопления Chaps. Оптимальные концентрации определяются для каждого применения.