Лентивирусный биосенсор PSD95-GFP

Описание:

Биосенсоры используются для обнаружения наличия/отсутствия определенного белка и его субклеточной локализации в живых клетках. Флуоресцентные метки позволяют визуализировать белок с помощью флуоресцентной микроскопии. Лентивирусные векторные системы обеспечивают высокую эффективность трансфекции делящихся и неделящихся клеток, долгосрочную экспрессию и низкую иммуногенность. НПО ЭкоТек представляет LentiBrite — серию предупакованных лентивирусных частиц, кодирующих белки аутофагии, апоптоза и клеточной структуры. Частицы мечены GFP и RFP. Лентивирусные частицы PSD-95-GFP позволяют анализировать динамику постсинаптического уплотнения (PSD) в живых нейрональных клетках. PSD-95 — белок семейства MAGUK, ассоциированный с дендритными шипиками, используется для изучения подвижности и оборота синаптических белков.

Применение:

Флуоресцентная микроскопия: первичные нейроны гиппокампа крыс высаживали в покрытые поли-D-лизином камеры, через 5 дней трансдуцировали лентивирусными частицами с MOI 20 в течение 24 часов. После замены среды и инкубации в течение 2 недель клетки визуализировали в живом состоянии с помощью масляно-иммерсионной широкопольной флуоресцентной микроскопии. PSD95-GFP имеет точечное распределение вдоль нейритов. Сравнение с иммуноцитохимией: нейроны гиппокампа трансдуцировали с MOI 40, через 24 часа заменили среду и инкубировали 2 недели. Иммуноцитохимическое окрашивание (красный) моноклональными антителами против PSD95 (НПО ЭкоТек) выявляет схожие паттерны экспрессии с GFP-белком (зеленый). Для оптимальной визуализации рекомендуется анализировать уровень экспрессии в течение 24-48 часов после трансфекции/инфекции. Инфицированные клетки можно замораживать и размораживать для сохранения флуоресценции. Длина и интенсивность флуоресценции варьируют между линиями клеток. Более высокие MOI могут потребоваться для труднотрансфицируемых линий. Категория исследования: нейронауки. Подкатегория: синапс и синаптическая биология.