Стрипы Millicoat® с покрытием из человеческого витронектина (96-луночные)

Описание:

Клеточная адгезия играет важную роль в клеточной коммуникации и регуляции, а также имеет фундаментальное значение для развития и поддержания тканей. Ученые постоянно изучают адгезию и миграцию различных типов клеток на белках внеклеточного матрикса (ECM). Стрипы для клеточной адгезии Millicoat представляют собой 12 x 8-луночные съемные стрипы в рамке планшета для удобства и гибкости при разработке анализов. Лунки в рядах A–G покрыты человеческим витронектином. Ряд H каждого стрипа покрыт BSA, который служит отрицательным контролем. Клетки высевают на покрытый субстрат, затем адгезивные клетки фиксируют и окрашивают. Относительную адгезию определяют по показателям абсорбции.

Применение:

ПРОЦЕДУРА: Оптимальные сроки и результаты анализа могут варьироваться для разных клеточных линий, но обычно достигаются с использованием субконфлюентных культур. 1. Регидратируйте стрипы, добавив 200 мкл PBS в каждую лунку, минимум на 15 минут при комнатной температуре. Удалите PBS. 2. Приготовьте суспензию отдельных клеток, предпочтительно с использованием неферментативного диссоциирующего буфера. Оптимальную плотность клеток определяют титрованием; обычно от 1x10E5 до 1x10E7 клеток/мл. 3. Добавьте по 100 мкл разведенной клеточной суспензии в каждую лунку. Инкубируйте планшет при 37°C в CO2-инкубаторе в течение 45 минут. Осторожно промойте планшет 2–3 раза PBS с Ca2+/Mg2+ (200 мкл/лунка). 4. Добавьте 100 мкл 0,2% кристаллического фиолетового в 10% этаноле в каждую лунку. Инкубируйте 5 минут при комнатной температуре. Удалите краситель. Промойте стрипы 3–5 раз PBS (300 мкл/лунка). 5. Добавьте 100 мкл солюбилизирующего буфера (50/50 смесь 0,1 M NaH2PO4, pH 4,5 и 50% этанола) в каждую лунку. Инкубируйте при комнатной температуре при осторожном встряхивании до полного солюбилизации красителя (около 5 минут). 6. Измерьте абсорбцию при 540–570 нм на планшетном ридере. Категория исследования: Структура клеток.