Щелочная фосфатаза (из слизистой оболочки кишечника крупного рогатого скота)

Описание:

Щелочная фосфатаза из слизистой оболочки кишечника крупного рогатого скота представляет собой димерный мембранный гликопротеин. Существует по крайней мере три изоформы, которые обычно содержат два N-связанных и один или более O-связанных гликана на мономер. Фермент требует для активности ионы цинка, а также магния или кальция. Это гликопротеин, содержащий около 12% углеводов (6% гексоз и 6% других нейтральных сахаров). Каждая молекула щелочной фосфатазы содержит четыре атома цинка и четыре дисульфидных мостика. Максимальная активность достигается в присутствии магния. Фермент катализирует гидролиз моноэфиров фосфорной кислоты, таких как п-нитрофенилфосфат, фенилфосфат, фенолфталеинфосфат, α-глицеролфосфат, β-глицеролфосфат, 2-фосфорилглицерат, триозофосфат, глюкозо-6-фосфат, глюкозо-1-фосфат, фруктозо-1-фосфат, фруктозо-6-фосфат, аденозин-5′-фосфат, аденозин-3′-фосфат, фосфоенолпируват и β-никотинамидадениндинуклеотидфосфат. Сильными ингибиторами щелочной фосфатазы являются арсенат, цистеин, йод, неорганический фосфат, пирофосфат, диизопропилфосфат, трифенилфосфат, диизопропилфторфосфат и L-фенилаланин.

Применение:

Щелочная фосфатаза может использоваться для дефосфорилирования казеина и других белков. Также она применяется для дефосфорилирования 5′-концов ДНК или РНК для предотвращения самолигирования. После дефосфорилирования ДНК или РНК можно метить радиоактивным фосфатом с помощью Т4-полинуклеотидкиназы. Фермент от НПО ЭкоТек использовался в анализе фосфатидилинозитол-4-фосфата и фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата, а также в щелочно-фосфатазных анализах с использованием электрода, модифицированного Nafion™. Щелочная фосфатаза используется для конъюгации с антителами и другими белками для ELISA, вестерн-блоттинга и гистохимического обнаружения. Она рутинно применяется для дефосфорилирования белков (например, казеина) и нуклеиновых кислот. Может использоваться для мечения белков, когда требуется высокая чувствительность. Рекомендуется для конъюгации антител и белков с высокой удельной активностью.