PA317, клеточная линия мышиных фибробластов

Описание:

Клеточная линия PA317 получена путём котрансфекции клеток NIH 3T3 TK- конструктом упаковочного вектора pPAM3 и фрагментом pBR322, несущим ген тимидинкиназы вируса простого герпеса. Конструкт pPAM3 содержит несколько мутаций и делецию упаковочного сигнала, что предотвращает продукцию хелперного вируса и перенос упаковочной функции. Трансфекция или инфицирование ретровирусными векторами приводит к продукции ретровирусных вирионов с амфотропным хозяинным диапазоном, способных инфицировать клетки млекопитающих. Клетки PA317 теряют упаковочную способность при длительном культивировании, поэтому рекомендуется регулярно проводить селекцию в среде HAT (0,03 мМ гипоксантин, 0,001 мМ аметоптерин, 0,02 мМ тимидин) в течение 5 дней с последующим культивированием в среде HT (0,03 мМ гипоксантин, 0,02 мМ тимидин) в течение 4 дней для разбавления остаточного аметоптерина. После селекции клетки стабильны в течение как минимум 1 месяца. Условия культивирования: DMEM с 2 мМ глутамина и 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, пересев субконфлюэнтных культур (70–80%) в соотношении 1:2–1:3 с посевной плотностью 3–5×10^4 клеток/см² с использованием 0,25% трипсина, при 37°C и 5% CO2. Доступны форматы: клетки (1VL), ДНК (5 мкг) и РНК (5 мкг).

Применение:

Клеточная линия PA317 применяется для трансфекции и исследований вирусов, в частности вируса герпеса.