Коллагеназа из Clostridium histolyticum, тип IA

Описание:

Коллагеназа из Clostridium histolyticum (синоним: клостридиопептидаза A), тип IA, с активностью 0,5–5,0 единиц FALGPA на мг твердого вещества и ≥125 коллагендигестивных единиц (CDU) на мг. Фермент активируется четырьмя грамм-атомами кальция на моль фермента; для активности требуется Zn2+. Культуральный фильтрат содержит не менее семи протеаз с молекулярной массой от 68 до 130 кДа. Оптимум pH составляет от 6,3 до 8,8. Фермент узнает последовательность -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-, где X чаще всего нейтральная аминокислота. Ингибируется EGTA, β-меркаптоэтанолом, глутатионом, тиогликолевой кислотой и 8-гидроксихинолином. Продукт эквивалентен первой 40% фракции сульфата аммония по Mandl и соавт. Растворы обычно готовят в концентрации 1–2 мг/мл в TESCA-буфере (50 мМ TES, 0,36 мМ хлорид кальция, pH 7,4 при 37 °C). В исходном виде продукт стабилен в течение одного года при -20 °C; растворы сырой коллагеназы стабильны при быстром замораживании аликвот (10 мг/мл) и хранении при -20 °C. Повторные циклы замораживания-оттаивания повреждают раствор. Продукт сохраняет 100% активности в течение 7 часов при хранении на льду.

Применение:

Фермент применяется вместе с другими протеазами для дезагрегации тканей: опухолей человека, почек мыши, головного мозга человека и эпителиальных тканей легких. Полезен в исследованиях перфузии печени и почек, при переваривании поджелудочной железы, выделении непаренхиматозных клеток печени крысы и гепатоцитов. Использовался для переваривания коллагена I типа из трабекулярной и кортикальной кости крупного рогатого скота, а также в качестве положительного контроля в FALGPA-анализе на клетках стрептококков группы B. Подходит для получения суспензии отдельных клеток для секвенирования.