Раствор диспазы II PluriSTEM®

Описание:

Протеолитические ферменты, такие как трипсин, коллагеназа и проназа, обычно используются для диспергирования тканей и клеток. Однако эти ферменты часто повреждают клетки, нестабильны во время инкубации, могут быть гетерогенными и источником микоплазменного загрязнения. Диспаза-II используется для получения клеток из различных тканей и органов. Диспаза-II зарекомендовала себя как быстрый, эффективный и в то же время щадящий агент для разделения многих тканей и клеток, выращенных in vitro. Диспаза особенно подходит для диссоциации тканей и субкультивирования, так как не повреждает клеточные мембраны. PluriSTEM® Dispase-II валидирован для работы совместно с PluriSTEM Human ES/iPS Medium (SCM130) для культивирования и пассирования человеческих эмбриональных и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. Фермент диспаза-II продуцируется Bacillus polymyxa. Раствор представляет собой стерильный отфильтрованный раствор фермента в буфере, активен в диапазоне pH 6,5–8,5 и при температурах от 2 до 37°C. Не содержит компонентов животного происхождения, что снижает риск контаминации. Рекомендуется хранить при -20°C.

Применение:

Оптимальная техника пассирования определяется пользователем и зависит от типа клеток и условий культивирования. Рекомендуемый протокол: 1. Покрыть 6-луночные планшеты матригелем (1:20, 1,5 мл на лунку). Инкубировать при 2–8°C в течение ночи или при комнатной температуре не менее 30–60 минут перед использованием. 2. Удалить покрытие матригелем. Добавить 2 мл полной среды в каждую лунку. 3. Удалить участки дифференцировки в культуре. 4. Аспирировать среду. 5. Промыть один раз 2 мл PBS. 6. Добавить 1,5 мл раствора диспазы II на лунку. Инкубировать при 37°C в течение 7 минут. 7. Промыть 2 раза по 2 мл PBS без Mg и Ca. 8. Добавить 2 мл полной среды в каждую лунку и использовать скребок для отделения колоний. 9. Собрать соскобленные клетки в 15 мл коническую пробирку. 10. Центрифугировать при 800 об/мин 5 минут. 11. Ресуспендировать в соответствующем объеме полной среды. Типичное соотношение пассирования 1:5–1:6 в зависимости от плотности клеток. Клетки готовы к пассированию через 5–6 дней при использовании PluriSTEM Human ES/iPS Medium. Категория исследования: Исследования стволовых клеток. Подкатегория: Ферменты и биохимия.