LentiBrite GFP-β-актин лентивирусный биосенсор

Описание:

Актин — высокоabundant глобулярный белок, содержащийся в цитозоле всех эукариотических клеток. Он собирается в головка-к-хвосту, образуя двойные спиральные поляризованные микрофиламенты. Актиновые микрофиламенты составляют одну из трёх основных структур цитоскелета и участвуют во многих важных клеточных процессах, включая мышечное сокращение, подвижность клеток, цитокинез, движение везикул и органелл, передачу сигналов, создание и поддержание межклеточных контактов и формы клеток. У позвоночных идентифицированы три основные группы изоформ актина: альфа, бета и гамма; в большинстве типов клеток β-актин является основным компонентом цитоскелета. Слияния флуоресцентных белков с β-актином оказались очень полезными инструментами для изучения динамики актиновых микрофиламентов во многих клеточных процессах. Лентивирусные частицы LentiBrite GFP-β-актин от НПО ЭкоТек обеспечивают яркую флуоресценцию и точную локализацию для анализа динамики актиновых микрофиламентов в живых клетках, включая труднотрансфицируемые типы клеток. Преимущества: предварительно упакованные, флуоресцентно меченные GFP и RFP; более высокая эффективность трансфекции по сравнению с традиционными химическими методами; способность трансфицировать делящиеся, неделящиеся и труднотрансфицируемые клетки (например, первичные или стволовые клетки); отсутствие нарушения клеточной функции.

Применение:

Сравнение иммуноцитохимии и анализ ингибиторов: клетки HeLa высевали в камерные слайды и трансдуцировали лентивирусными частицами при MOI 20 в течение 24 часов. После замены среды и дополнительной инкубации в течение 48 часов клетки либо не обрабатывали, либо инкубировали в течение 2 часов в полной среде, содержащей 2 мкМ цитохалазина D, или в течение 2 часов в полной среде, содержащей 200 нМ джасплакинолида, для индукции деполимеризации актина. Иммуноцитохимическое окрашивание (красный) тех же полей зрения с помощью TRITC-конъюгированного фаллоидина показывает сходные паттерны экспрессии с GFP-белком (зеленый). Труднотрансфицируемые типы клеток: первичные клетки HUVEC или HuMSC высевали в камерные слайды и трансдуцировали лентивирусными частицами при MOI 40 в течение 24 часов. Визуализация с помощью конфокальной микроскопии: клетки HeLa обрабатывали, как на рис. 2A в паспорте. Затем клетки обрабатывали с использованием набора ProteoExtract Native Cytoskeleton Enrichment (Кат. № 17-10210). Необогащенные и обогащенные фракции. Изображения получены с помощью масляно-иммерсионной конфокальной флуоресцентной микроскопии. Клетки HT-1080 обрабатывали, как на рис. 2A и 2B паспорта. Для оптимальной визуализации рекомендуется анализировать уровень экспрессии через 24-48 ч после трансфекции/инфекции, так как интенсивность флуоресценции может со временем снижаться, особенно в труднотрансфицируемых линиях. Инфицированные клетки можно замораживать после успешной трансфекции/инфекции и размораживать в культуре для сохранения положительной флуоресцентной экспрессии более 24-48 ч. Длительность и интенсивность флуоресцентной экспрессии варьируется в зависимости от линии клеток. Для труднотрансфицируемых линий могут потребоваться более высокие MOI.