Лентивирусный биосенсор LentiBrite GFP-LC3 контрольный мутант

Описание:

Лентивирусные биосенсоры LentiBrite от НПО ЭкоТек предназначены для визуализации белков в живых клетках. Данный контрольный мутант GFP-LC3-G120A не способен к модификации фосфатидилэтаноламином (PE) и не транслоцируется к аутофагосомам, что делает его идеальным отрицательным контролем для исследований аутофагии. Преимущества: высокая эффективность трансфекции, возможность трансфекции делящихся и неделящихся клеток, длительная стабильная экспрессия трансгена, низкая иммуногенность. Биосенсоры позволяют отслеживать локализацию белка LC3 в живых клетках методом флуоресцентной микроскопии, что важно для изучения роли аутофагии в раке, нейродегенерации и инфекциях.

Применение:

Для флуоресцентной микроскопии: клетки HT-1080 трансдуцировали лентивирусными частицами при MOI 20 в течение 24 ч. После замены среды и инкубации в течение 48 ч клетки стимулировали для индукции аутофагии (EBSS с ингибитором лизосом). Мутантный GFP-LC3-G120A демонстрирует диффузное распределение без транслокации к аутофагосомам. Для иммуноцитохимии: клетки HeLa трансдуцировали аналогично, с добавлением 3-метиладенина (3-MA) в качестве ингибитора аутофагии. 3-MA не влияет на локализацию мутанта. Для труднотрансфицируемых первичных клеток (HUVEC, HuMSC) рекомендуется MOI 40; оптимальная визуализация через 24–48 ч.