Лентивирусный биосенсор RFP-Rad51

Описание:

Лентивирусные биосенсоры LentiBrite от НПО ЭкоТек представляют собой готовые к использованию лентивирусные частицы, кодирующие белки, важные для процессов аутофагии, апоптоза и клеточной структуры. Биосенсоры мечены флуоресцентными метками GFP или RFP, что позволяет визуализировать белки в живых клетках с помощью флуоресцентной микроскопии или покадровой съемки. Преимущества: высокая эффективность трансфекции по сравнению с химическими методами, способность трансфицировать делящиеся и неделящиеся клетки, включая первичные и труднотрансфицируемые линии, длительная стабильная экспрессия трансгена и низкая иммуногенность. Лентивирусные частицы RFP-Rad51 обеспечивают яркую флуоресценцию и точную локализацию Rad51. Rad51 — эукариотическая рекомбиназа, гомолог RecA, играющая ключевую роль в гомологичной рекомбинации и репарации двуцепочечных разрывов ДНК. Избыток Rad51, характерный для многих раковых клеток, приводит к устойчивости к радио- и химиотерапии и геномной нестабильности. Биосенсор позволяет отслеживать динамику компартментализации Rad51 в живых клетках.

Применение:

Флуоресцентная микроскопия: клетки HeLa трансдуцировали лентивирусными частицами при MOI=20 в течение 24 ч, фиксировали формальдегидом и исследовали. Распределение RFP-Rad51 ядерное, с точечными структурами. Иммуноцитохимия: клетки U2OS трансдуцировали (MOI=5), инкубировали 48 ч, окрашивали антителами к Rad51 (зеленый) — совпадение с RFP-Rad51 (красный). Труднотрансфицируемые клетки: HUVEC и HuMSC трансдуцировали (MOI=20 и 5). Конфокальная микроскопия: клетки U2OS контрастировали FITC-фаллоидином (актин, зеленый) и DAPI (ядро, синий). Для оптимальной визуализации анализ проводят через 24–48 ч после трансфекции; замороженные клетки сохраняют экспрессию. Категория исследований: апоптоз и рак, подкатегория: клеточный цикл, репликация и репарация ДНК.