Описание:
Duolink® flowPLA Detection Kit содержит олигонуклеотиды обнаружения, конъюгированные с флуорофором FarRed (максимум возбуждения 644 нм, эмиссии 669 нм). Набор предназначен для детекции белков, белок-белковых взаимодействий и посттрансляционных модификаций на уровне отдельных молекул в фиксированных клетках с использованием проточной цитометрии. В основе технологии лежит анализ проксимальной лигировки (PLA). В набор входят все необходимые реагенты для амплификации и детекции связанных PLA-зондов. Продукт поставляется компанией НПО ЭкоТек.
Применение:
Технология Duolink® PLA позволяет эндогенно детектировать взаимодействия белков, посттрансляционные модификации и уровни экспрессии белков на уровне единичных молекул в фиксированных клетках. Наборы Duolink® flowPLA Detection Kits обеспечивают чувствительную детекцию белков, их взаимодействий и модификаций в клеточных популяциях методом проточной цитометрии. Для эксперимента необходимы фиксированные суспендированные клетки, два первичных антитела к целевым белкам, пара PLA-зондов (один 100RXN PLUS и один 100RXN MINUS), промывочный буфер и набор Duolink® flowPLA Detection Kit. Доступны наборы с 5 различными флуорофорами: Violet, Red, Green, Orange или FarRed. Анализ проводится на стандартном проточном цитометре. Пользователь должен предоставить суспензию фиксированных клеток, первичные антитела и соответствующие PLA-зонды. Следуйте протоколу Duolink® PLA для проточной цитометрии. Набор FarRed использовался для детекции взаимодействия Crabp1 с Raf-киназой в клетках MOLT-4, HeLa, нейронах и эндотелиальных клетках.



