Набор MTT для оценки жизнеспособности клеток

Описание:

MTT (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид) — это бледно-желтый субстрат, который восстанавливается живыми клетками до темно-синего формазана. Процесс требует активных митохондрий, поэтому даже только что погибшие клетки не расщепляют MTT. Колориметрический анализ может использоваться для оценки пролиферации или цитотоксичности. Набор включает все необходимые реагенты для проведения анализа в 96-луночных планшетах. Метод основан на способности митохондриальных дегидрогеназ восстанавливать тетразолиевую соль MTT до нерастворимого формазана, который после растворения дает гомогенный синий раствор. Оптическая плотность пропорциональна числу живых клеток. Набор широко применяется для скрининга лекарственных препаратов, оценки цитотоксичности и изучения клеточной пролиферации. Интересный факт: формазан нерастворим в воде, но хорошо растворим в изопропаноле с соляной кислотой, что позволяет проводить точные колориметрические измерения.

Применение:

Процедура: 1) Проведите цитотоксический или пролиферативный анализ в 96-луночном планшете. Конечный объем среды — 0,1 мл. Среда может содержать до 10% FBS. 2) Добавьте 0,01 мл раствора MTT, перемешайте легким постукиванием. 3) Инкубируйте 4 часа при 37 °C. За это время в живых клетках образуются кристаллы формазана. 4) Добавьте 0,1 мл изопропанола с 0,04 Н HCl, тщательно перемешайте. HCl переводит феноловый красный в желтый цвет, не мешающий измерению. Изопропанол растворяет формазан, давая гомогенный синий раствор. 5) В течение часа измерьте оптическую плотность на ELISA-ридере при 570 нм (референс 630 нм). Результаты: анализ детектирует 200–50 000 клеток. Оптическая плотность прямо пропорциональна числу живых клеток. Набор поставляется НПО ЭкоТек.