Стрипы для адгезии клеток, покрытые фибронектином человека (96-луночные), Millicoat®

Описание:

Адгезия клеток играет ключевую роль в клеточной коммуникации и регуляции, а также имеет фундаментальное значение для развития и поддержания тканей. Ученые постоянно исследуют адгезию и миграцию различных типов клеток на белках внеклеточного матрикса (ВКМ). Стрипы для адгезии клеток Millicoat® представляют собой 12 x 8-луночных съемных стрипов в рамке планшета, что обеспечивает удобство и гибкость при постановке экспериментов. Лунки в рядах A–G покрыты человеческим фибронектином. Ряд H каждого стрипа покрыт БСА (бычьим сывороточным альбумином), который служит отрицательным контролем. Клетки высевают на покрытый субстрат, затем прикрепившиеся клетки фиксируют и окрашивают. Относительное прикрепление определяют по оптической плотности.

Применение:

Стрипы для адгезии клеток Millicoat® поставляются в виде 12 x 8-луночных съемных стрипов в рамке 96-луночного планшета для удобства и гибкости при постановке экспериментов. ПРОТОКОЛ: Оптимальные условия могут варьироваться для разных клеточных линий, но обычно используются субконфлюэнтные культуры. 1. Регидратируйте стрипы 200 мкл ФСБ (фосфатно-солевого буфера) на лунку в течение не менее 15 мин при комнатной температуре. Удалите ФСБ. 2. Приготовьте суспензию отдельных клеток, желательно с использованием неферментативного диссоциирующего буфера. Оптимальную плотность клеток определяют титрованием; обычно от 1×10⁵ до 1×10⁷ клеток/мл. 3. Добавьте 100 мкл суспензии клеток в каждую лунку. Инкубируйте планшет при 37°C в CO₂-инкубаторе в течение 1 ч. Аккуратно промойте планшет 2–3 раза ФСБ, содержащим Ca²⁺/Mg²⁺ (200 мкл/лунку). 4. Добавьте 100 мкл 0,2% кристаллического фиолетового в 10% этаноле в каждую лунку. Инкубируйте 5 мин при комнатной температуре. Удалите краситель. Аккуратно промойте планшет 3 раза ФСБ (300 мкл/лунку). 5. Добавьте 100 мкл солюбилизирующего буфера (смесь 1:1 0,1 М дигидрофосфата натрия, pH 4,5, и 50% этанола) в каждую лунку. Инкубируйте при мягком встряхивании при комнатной температуре до полной солюбилизации связанного красителя (примерно 5 мин). 6. Измерьте оптическую плотность при 540–570 нм на планшетном ридере. Категория исследований: клеточная структура. Продукт производства НПО ЭкоТек.