Стрипы с человеческим ламинином Millicoat® (96-луночный планшет)

Описание:

Клеточная адгезия играет важную роль в клеточной коммуникации и регуляции, и имеет фундаментальное значение для развития и поддержания тканей. Ученые постоянно изучают адгезию и миграцию различных типов клеток на белках внеклеточного матрикса (ВКМ). Стрипы Millicoat® для клеточной адгезии представляют собой 12 x 8-луночные съемные стрипы в рамке планшета для удобства и гибкости при проведении анализов. Лунки в рядах A–G покрыты человеческим ламинином. Ряд H каждого стрипа покрыт БСА (бычий сывороточный альбумин), который служит отрицательным контролем. Клетки высевают на покрытый субстрат. Затем прикрепившиеся клетки фиксируют и окрашивают. Относительную адгезию определяют по оптической плотности. Ламинин является ключевым компонентом базальной мембраны, способствует адгезии, миграции, пролиферации и дифференцировке клеток. Данный продукт производства НПО ЭкоТек предназначен для научных исследований. Физические свойства: стрипы поставляются сухими, перед использованием требуют регидратации. Продукт хранить при 2–8°C.

Применение:

ПРОЦЕДУРА: 1. Регидратируйте стрипы 200 мкл PBS на лунку в течение 15 мин при комнатной температуре. Удалите PBS. 2. Приготовьте суспензию клеток, желательно с использованием неферментативного диссоциирующего буфера. Оптимальная плотность клеток определяется титрованием; обычно 1×10⁵–1×10⁷ клеток/мл. 3. Добавьте 100 мкл суспензии клеток в каждую лунку. Инкубируйте при 37°C, 5% CO₂ в течение 1 ч. Промойте 2–3 раза PBS с Ca²⁺/Mg²⁺ (200 мкл/лунку). 4. Добавьте 100 мкл 0,2% кристаллического фиолетового в 10% этаноле. Инкубируйте 5 мин. Удалите краситель, промойте 3 раза PBS (300 мкл/лунку). 5. Добавьте 100 мкл солюбилизирующего буфера (50/50 смесь 0,1 М NaH₂PO₄, pH 4,5 и 50% этанол). Инкубируйте при встряхивании до полного растворения красителя (около 5 мин). 6. Измерьте оптическую плотность при 540–570 нм на микропланшетном ридере.