Рибонуклеаза H (RNase H)

Описание:

Рибонуклеаза H (RNase H) — неспецифическая эндорибонуклеаза, локализованная в ядре и цитоплазме. Фермент повсеместно распространён среди многих организмов, включая вирусы и человека. RNase H специфически расщепляет РНК в гибридах РНК:ДНК, при этом для активности требуется минимум четыре последовательных пары оснований (РНК:ДНК). Продуктами расщепления являются 5′-олигорибонуклеотиды. Источник: Escherichia coli H560 pol A1. Буфер хранения: 25 мМ Трис-HCl, 50 мМ KCl, 1 мМ дитиотрейтол, 0,1 мМ ЭДТА, 50% глицерин (об/об), pH 8,0 (+4°C). Удельная активность: 1 x 10³ ед/мл (определено по методу Hillenbrand & Staudenbauer). Физические свойства: фермент стабилен при хранении в указанном буфере, не содержит ДНКазы. Применяется в молекулярно-биологических исследованиях для изучения репликации ДНК, синтеза кДНК, удаления мРНК и количественного анализа РНК.

Применение:

Рибонуклеаза H (RNase H) широко используется в молекулярной биологии. Основные области применения: in vivo инициация синтеза ДНК, праймированная РНК; удаление мРНК при синтезе второй цепи кДНК; сайт-специфическое расщепление РНК; детекция участков РНК:ДНК в двуцепочечной ДНК природного происхождения; удаление поли(А) последовательностей мРНК в присутствии олиго(dT); выделение РНК и количественная ОТ-ПЦР (RT-PCR). Фермент также используется в исследованиях репликации плазмид и репарации ДНК. При оптимальных условиях RNase H не расщепляет одноцепочечную РНК или ДНК, что обеспечивает высокую специфичность.