Набор для MTT-анализа роста клеток, колориметрический

Описание:

MTT (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид) — бледно-желтый субстрат, который расщепляется живыми клетками с образованием темно-синего формазана. Процесс требует активных митохондрий; даже свежеубитые клетки не расщепляют значительные количества MTT. Колориметрический анализ может использоваться для оценки пролиферации или комплемент-опосредованной цитотоксичности. В набор входят реагент A: MTT, 50 мг/флакон; раствор B: PBS pH 7,4, 15 мл. Для приготовления рабочего раствора добавьте 10 мл раствора B к одному флакону реагента A, хорошо перемешайте, стерильно отфильтруйте и храните в темноте при 4 °C. Растворение может занять ночь; не нагревайте раствор. При необходимости растворите кристаллы, отрегулировав pH 1–2 каплями HCl. Смесь A/B стабильна при 2–8 °C до двух недель. Набор храните при 2–8 °C до шести месяцев.

Применение:

Процедура: проведите лимфокин-, митоген- или комплемент-опосредованный цитотоксический анализ стандартными методами в 96-луночных плоскодонных планшетах; конечный объем среды в лунке — 0,1 мл, среда (например, RPMI или DMEM) может содержать до 10% фетальной бычьей сыворотки. В конце анализа добавьте 0,01 мл раствора MTT в каждую лунку, перемешайте постукиванием. Инкубируйте при 37 °C в течение 4 часов (оптимальное время может варьировать). Затем добавьте 0,1 мл изопропанола с 0,04 Н HCl, тщательно перемешайте. В течение часа измерьте оптическую плотность на планшетном ридере при длине волны 570 нм и референсной 630 нм. Анализ обычно детектирует от 200 до 50 000 клеток типичной клеточной линии; полезный диапазон — 1 000–50 000 клеток.