ChemiBLOCKER

Описание:

ChemiBLOCKER — это уникальный мембранный блокирующий агент. В качестве белоксодержащего блокатора неживотного происхождения он предлагает альтернативу блокирующим реагентам на основе молока, минимизируя риск неспецифического связывания антител с мембраной и снижая фон. ChemiBLOCKER может использоваться при разведениях до 20x, но для большинства применений подходит разведение в 5–10 раз. ChemiBLOCKER не содержит биотина и не будет мешать ABC-системам детекции. Препарат содержит фосфаты и может не подходить для использования с некоторыми фосфо-специфичными антителами. Для вестерн-блоттинга и ELISA рекомендуется оптимизация условий блокировки. Поставляется НПО ЭкоТек.

Применение:

Протокол вестерн-блоттинга и ELISA: 1. Приготовьте блокирующий раствор, смешав 1 часть ChemiBLOCKER с 1 частью 1X femto-TBST/PBST (также подходят TBST или PBST) для блокировки PVDF-мембран. Для нитроцеллюлозных мембран смешайте 1 часть ChemiBLOCKER с 3 частями 1X femto-TBST (TBST или PBST). Примечание: ChemiBLOCKER можно использовать при различных разведениях, может потребоваться оптимизация. ChemiBLOCKER не рекомендуется для исследования фосфопротеинов, так как содержит фосфорилированные белки. 2. Инкубируйте мембрану в блокирующем растворе (10–20 мл) в течение 60 минут при комнатной температуре с перемешиванием в запаиваемом пластиковом пакете. 3. Приготовьте буфер для разведения антител (ADB). Для PVDF-мембран смешайте 1 часть ChemiBLOCKER с 3 частями 1X femto-TBST/PBST (TBST или PBST). Инкубируйте мембрану в 5–10 мл первичных антител, разведённых в ADB, в течение 90 минут при комнатной температуре с перемешиванием. 4. Промойте мембрану 3 раза по 50 мл 1X femto-TBST (TBST или PBST) по 5 минут каждый при комнатной температуре с перемешиванием. 5. Инкубируйте мембрану в 5–10 мл вторичных антител, разведённых в ADB, в течение 90 минут при комнатной температуре с перемешиванием. 6. Промойте мембрану, как на шаге 4, но добавьте ещё одну промывку (всего 4). 7. Быстро промойте мембрану 3 раза (по 30 сек) в 50 мл чистой деионизированной воды и затем проявите блот с помощью детекционной системы femto-LUCENT (или другой предпочтительной системы).